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猪精液质量评定与精液体外保存探讨

2017-12-05

王维洪 罗亚东 俞万强

杭州越丰生物科技有限公司

猪人工授精技术在国内始于上世纪五十年代,盛于七十年代,但由于精液储存设备落后、精液保存技术匮乏和外三元母猪发情诊断难度较大等原因,人工授精的技术优势一直未能得到充分体现,进而导致养殖业者对该技术失去信心。直到本世纪初,在蓝耳病等急性传染病暴发的背景下,随着17℃恒温保存箱和商品化猪精液保存剂等新型人工授精器材的面世,人工授精的成功率逐渐得到提高,并在中等规模猪场开始兴起。报道测算,2001年,使用人工授精一头母猪年可节约成本在200元以上。鉴于人工授精技术在降低防疫压力和控制成本方面的明显优势,经过十余年的日趋成熟和蓬勃发展,到2010年统计,全国人工授精的普及率已经超过70%,时至今日,普及率则已达到90%以上。

而在人工授精中,精液质量评定与体外保存是两个关键因素,现就这两个方面作一探讨。

1 精液质量的评定

1.1 精液质量评定的方法

精液质量评定包括体积、颜色、密度、活力和形态等方面。目前有人工评定与CASA(Computer-aided sperm analysis)计算机辅助精子分析评定两种方法。

1.1.1 人工评定

人工评定:就是人工在显微镜下用血球细胞计数器计量精子的数量、活动精子数,以计算精液的密度和活力。

精子密度:最初借肋光学显微镜,将其分为密、中、稀三个级别进行分析,后来开始用计数板或密度仪进行定量分析,当然这就克服了主观性,提高准确性。

活动精子百分率(TM%,The percentage of total motile spermatozoa)指活精子数占总精子数的百分比。目前常用的是在显微镜视野下观察到的运动精子作为活精子。

精子活力:这是评价精子质量比较常用的指标,目前主要以肉眼在显微镜视野下观测做直线运动精子的百分率进行判断,也具有很强的主观性。且各个国家制定的标准也不尽相同。

形态检测:一般分为畸形率与精子顶体异常率两个部分。畸形率可在显微镜下肉眼根据精子的结构与形态进行判定,主观性大,正常精子中也会存在一定比例的畸形精子,但一般不会超过20%,良好精液中精子畸形率不超过18%。精子顶体分析则通过姬姆萨染色法或荧光染色法进行,需要掌握一定的染色技术,目前在国内尚不普及。

1.1.2 计算机辅助精子分析(CASA)

计算机辅助精子分析(CASA):CASA系统快速简便,可以在很大程度上避免人工评定的主观性,更可以实现检测的标准化,目前在国内大猪场和人工授精站中逐渐被采用。目前市场上大多CASA系统,不但可以实现常规检测,还可以对精子运动方式、运动轨迹和运动速率进行检测。但我国目前还未出台CASA标准,所以对众多CASA的优劣难于作出一个肯定的判断。

1.1.3 其他方法

近来随着技术的发展和低温生物学的不断深入,精子质量评价的新方法也开始出现,主要有精子质膜完整性、精子线粒体活性、精子顶体完整性、精子获能检测、精子DNA完整性的检测以及受精能力检测等方面,因目前还处于研究阶段,在此不作阐述。

1.2 精液质量的常规值

正常情况下,公猪的射精量在150毫升~250毫升之间。个体差异和品种差异,个别公猪一次射精的精液总量也可能达到600毫升。如果一头公猪平均射精量少于80毫升,就应认为这头公猪的射精量不足。

正常的公猪精液从浅灰白色到浓乳白色。但不正常的精液色泽并不少见。一是精液透明度高,这是精液精子密度低的一个明显表现。透明度高的精液,不必对精液做进一步的处理,直接按不合格精液处理。二是鲜红色的精液,说明精液带有较多的鲜血。三是绿色或黄色精液,是由于精液中有脓液造成的。这种精液并不多见,在一些老龄公猪偶有出现。主要原因是公猪的副性腺炎症造成。这种公猪应尽快淘汰,不必进行治疗。

正常精液精子密度平均2.5亿(1亿~3亿之间),从镜检看精子密度高的精液往往呈云雾状。正常精液的pH值在7.2~7.8之间。

能够前进运动的精子叫有效精子,唯有有效精子才有与卵子结合受精的可能性。精子的活力是指有效精子占总精子数的百分率,是鉴定精液品质比较主要的指标之一。一般用目测视野中呈直线前进运动的精子数占观察精子总数的百分比表示,采用0~1.0十级评分,分为10个等级。若视野中全部精子都作直线前进运动,评为1.0分;有90%的精子作直线前进运动,评为0.9分,其余类推。不过也有采用五级分制的评分方法。为保证较高的受精率,新鲜精液精子活力一般为0.7~0.8,液态保存精液活力一般在0.6以上,冷冻保存精液活力在0.3以上,方可用于输精。

1.3 影响精液质量的因素

影响精液质量的因素有很多,归纳起来有以下几个:品种因素、年龄因素、营养因素、环境因素、疾病因素以及采精频率等。

1.3.1 品种因素

正常而言采精量由多到少依次为大约克、长白和杜洛克。如长白猪正常采精量在250ml,杜洛克的正常采精量则在200ml左右。

1.3.2 年龄因素

一般而言,从性成熟到壮年,精液量和精子密度逐年增加,进入老年期就开始下降。以大约克为例,其在9月龄时采精量开始增加,精子密度也达到了1.75亿/ml,到5岁后,其精子密度则下降到1.5亿/ml以下。

1.3.3 营养因素

包括能量、蛋白、微量元素、维生素和激素水平。其中体重指标是一个重要的参考因子,控制体重,防止过胖是日常饲养管理的一个要点,用料量与体重的关系见下表。

表1 用料量与体重的关系

体重(kg) 总采食量(kg) 维持需要用料(kg) 射精与生精用料比(%) 维持用料比(%)
60 1.75 0.7 3 40
90 2.5 1.1 3.2 44
120 2.9 1.35 3.4 47
200 3 3.8 75
300 3.9 4.6 90

据研究,提高日采食消化能到38.66MJ时,虽提高了采精量和精子总数,但降低了精子密度,并增加了精子畸形率,且这一下降在统计学上是显著的。而当蛋白质提高到19%时,可提高血液中激素水平,从而提高公猪的性欲。在公猪日粮中添加一定量的维生素A和维生素E则可提高精子数和活力。另外,在公猪日粮中应防止微量元素锌的缺乏,并可适当添加一定量的微量元素硒。

1.3.4 环境因素

主要考虑季节、温度和环境卫生几个方面。分季节而言,春季精液质量比较好,夏季比较差。公猪比较适宜的环境温度为18℃~20℃。从实践中得出,在夏季肌注250mg睾酮可显著减少高温对畸形率的影响。

1.3.5 疾病因素

一些疾病(如蓝耳病、伪狂犬等)会对精液质量产生严重的影响,因而需做好这些疾病的免疫工作。

1.3.6 采精频率

采精频率过高不仅会造成采精量的减少,而且还会增加畸形精子的数量和比例。一般来说,对于年轻公猪和年老(5岁及以上)公猪,以一周一次为宜;对2岁~4岁的公猪则以3~5天一次为宜。

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